分享一篇发表在ACS central science上的文章，题目为“Investigation of Proteome-Tetrazine Reactivity for a Highly Selective Tetrazine Ligation in Live Cells”，通讯作者是来自庆熙大学的Sanghee Lee研究员、亚洲大学的Eunha Kim助理教授、江原大学的Jongmin ParK助理教授，第一位的研究兴趣是开发化学和生化工具来进行大脑研究和药物发现，后两位没有查到课题组主页，但看他们最近的文章和癌症，PROTAG等生化领域相关。

四嗪是常用的生物正交基团，然而四嗪和生物分子之间的反应很少被研究。本文研究了四嗪衍生物的非特异性蛋白质组反应性。

首先作者需要证明四嗪确实可以与蛋白上的亲核基团发生非特异性反应，于是作者合成了不同荧光团偶联的四嗪以及其不含四嗪的control，然后与细胞裂解液孵育，通过荧光胶证明了四嗪的蛋白质非特异性反应性。然后作者还通过二乙胺和硫乙醇与四嗪反应，证明了其反应后的产物的化学形式。

然后作者合成了23种四嗪衍生物，与hela细胞裂解液孵育后进行荧光胶，研究了四嗪上取代基对于其蛋白质非特异性反应性的影响。对于四嗪3位来说，苯基取代：对于蛋白质反应性无影响；直链烷烃取代：链越短，蛋白质反应性越小；环烷烃取代：环越小，蛋白质反应性越小。此外，如果提前用马来酰亚胺或 N-羟基琥珀酰亚胺酯封闭氨基或巯基，蛋白质非特异性标记会减少，证明了是四嗪与蛋白质赖氨酸和半胱氨酸的反应。

然后作者使用他们筛选的蛋白质非特异性最小的探针进行了BTK蛋白的成像，他们证明Tz20在有比较小的非特异性蛋白标记的同时，可以在活细胞和离体中成功的高选择性标记BTK。

总的来说，本文系统的研究了四嗪的蛋白质非特异性标记，提高了基于四嗪的点击反应的准确性和效率。

本文作者：YDP

责任编辑：WYQ

DOI：10.1021/acscentsci.5c00525

原文链接：https://doi.org/10.1021/acscentsci.5c00525